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大鼠自身免疫性腎小球腎炎模型誘導(dǎo)方案

更新時(shí)間:2024-12-09點(diǎn)擊次數(shù):294

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大鼠自身免疫性腎小球腎炎模型誘導(dǎo)

背景簡介:

 

Goodpasture綜合征是一種由腎臟和肺部針對腎小球基底膜(GBM)的自身抗體引起的自身免疫性疾病,表現(xiàn)為嚴(yán)重的腎臟疾病和肺出血?;颊咦陨砜贵w識(shí)別IV型膠原(NC1)α鏈(α1-α6)的非膠原結(jié)構(gòu)域,該結(jié)構(gòu)域包含GBM。更具體地說,主要的Goodpasture抗原在人類中被鑒定為IV型膠原α3鏈的NC1結(jié)構(gòu)域[α3IVNC1],并在幾種動(dòng)物模型中得到證實(shí)。此外,Kohda等人報(bào)告稱,通過用重組α4IVNC1片段免疫Wistar KyotoWKY)大鼠或免疫抗α4IVNC1抗體,可以在WKY大鼠中誘導(dǎo)這種疾病模型。

為了誘導(dǎo)大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腎小球腎炎,Chondrex提供了兩種免疫方案,分別為抗IV型膠原NC1片段抗體和IV型膠原NC1片段誘導(dǎo)的腎炎。大鼠抗α4IVNC1單克隆抗體可以通過單次腹腔(IP)或靜脈(IV)注射誘導(dǎo)腎炎。Chondrex,股份有限公司還提供小鼠和大鼠腎NC1片段作為ELISA抗原,以量化自身抗體對免疫牛NC1片段的交叉反應(yīng)性。

操作流程:

IV型膠原NC1片段誘導(dǎo)的大鼠腎小球腎炎

1)動(dòng)物選擇7-8周齡WKY品系大鼠。對模型的敏感性與WKY大鼠亞系,供應(yīng)商和實(shí)驗(yàn)設(shè)施有關(guān)。

2)免疫原:1ml 0.05mol/LPBS Ph7.4)溶解IV型膠原NC1片段(cat#1102,1mg

3)乳劑制備:IV型膠原NC1片段與弗氏佐劑(CFA, 1mg/ml,cat#7008)等體積混合制備乳劑。

注意:乳劑混完后,滴一滴到水中檢測乳劑質(zhì)量,如果散開表明質(zhì)量不好,需要重新制備

4)免疫:大鼠尾根部皮下注射200ul制備好的乳劑。

注意:第七天加強(qiáng)免疫對一些低敏感品系,誘發(fā)腎炎模型是有效的。如果加強(qiáng)免疫應(yīng)該用IFA佐劑和IV型膠原NC1片段配成的乳劑去誘導(dǎo),而不是CFA佐劑,尾根部皮下免疫200ul。研究者應(yīng)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,比如免疫時(shí)間,劑量和供應(yīng)商等。

5)模型評估:

免疫后,建議觀察大鼠至35天。每周進(jìn)行16小時(shí)蛋白尿評估,以確認(rèn)腎炎模型的嚴(yán)重程度。推薦使用Chondrex 大鼠尿蛋白檢測試劑盒(cat#9040,進(jìn)行蛋白尿測定。易感WKY大鼠的蛋白尿在14-21天可以檢測到,在21-28天達(dá)到高峰。

rr.png

WKY 大鼠(雌性,7周)免疫IV型膠原NC1片段和CFA配成的乳劑后,尿蛋白水平變化,從第10天檢測到蛋白尿,持續(xù)到第28天。

產(chǎn)品訂購:

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱


規(guī)格

1102

NC1 Fragment of Bovine GBM   Type IV Collagen

IV型膠原NC1片段

1mg

7008

Complete Freund's Adjuvant  ,CFA

弗氏佐劑

1mg/ml,5ml

9040

Rat Urinary Protein Assay   Kit

大鼠尿蛋白試劑盒

96T










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