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產(chǎn)品中心

當前位置:首頁產(chǎn)品中心DiacloneELISA Kit人 IL-33 ELISA 試劑盒

人 IL-33 ELISA 試劑盒
產(chǎn)品簡介:

人 IL-33 ELISA 試劑盒用于體外定量檢測人血清,血漿,緩沖液或細胞培養(yǎng)液中的白介素33

產(chǎn)品型號:

更新時間:2024-12-09

廠商性質(zhì):代理商

訪問量:854

服務(wù)熱線

01084640949

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產(chǎn)品介紹

Human IL-33 ELISA Kit

 用途人IL-33 ELISA試劑盒用于體外定量檢測人血清,血漿,緩沖液或細胞培養(yǎng)液中的白介素33,試劑盒可用于檢測天然和重組的人IL-33,此試劑盒只用于科研,不能用于診斷。

檢測原理:

IL-33試劑盒應(yīng)用的是夾心法固相酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)。IL-33特異單克隆抗體被包被于微孔板上,已知IL-33濃度的標準品和未知濃度的樣品可在此反應(yīng)孔中進行檢測。先將IL-33抗原和生物素標記IL-33特異單克隆抗體同時孵育。洗滌后加入親和素過氧化物酶,孵育后洗去未結(jié)合的酶。其后加入底物,產(chǎn)生顏色反應(yīng),顏色的深淺與樣品中IL-33的濃度成一定的比例關(guān)系。

試劑盒組成及配制:

 

試劑(2-8保存)

1x96孔的配置

產(chǎn)品編號:#873.020.096

 

配制

96T微孔板

1

即用型(已包被)

塑料板蓋

2


標準品:1000pg/ml

2

按瓶上的說明稀釋(見試劑制備,)

標準品稀釋緩沖液

1瓶(25ml

10X濃度,用純水稀釋

生物素標記IL-33抗體

1(0.4ml)

用生物素標記抗體稀釋液稀釋(見試劑制備)

生物素標記抗體稀釋液

1(7.5ml)

即用型

親和素-HRP

2(5ul)

0.5ml HRP稀釋液預(yù)稀釋(見試劑制備,)

HRP稀釋液

1(23ml)

即用型

洗滌緩沖液

1(10ml)

200x,蒸餾水稀釋(見試劑制備)

TMB

1(11ml)

即用型

H2SO4終止液

1(11ml)

即用型

 

自備材料:

蒸餾水;加樣器:10ul, 50ul, 100ul, 200ul, 1000ul; 漩渦振蕩器和磁力攪拌器

保存條件:

試劑盒保存于2-8度,

洗滌緩沖液:制備好后,2-8度可保存1周以上

標準品:制備好后即用,不要保存。

生物素標記二抗:制備好后即用,不要保存。

親和素-HRP: 制備好后即用,不要保存。

樣品收集,處理和保存:

1.       細胞培養(yǎng)上清:1000xg離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

2.       血清——操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000xg離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

3.       EDTA,檸檬酸鹽和肝素血漿可用于檢測。1000Xg離心30分鐘去除顆粒。

4.       如果樣品不直接使用,將其分為小部分(250-500ul-70下保存,避免反復(fù)凍融。

如果可能,不要使用溶血和高脂血。如果血清中有大量的顆粒,檢測前先離心或過濾。

注意:不要在3756加熱解凍。在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍

檢測程序

使用前,將所有試劑充分混合,不要使液體產(chǎn)生泡沫。根據(jù)樣品數(shù)量加上空白,標準品決定所需的板條,每個樣品,標準品,空白和質(zhì)控都應(yīng)做雙份。

詳細步驟

1

制備標準曲線

2

按實驗方案在對應(yīng)孔加入100ul標準品和樣本,標準品,樣本及空白孔均做復(fù)孔。

3

用塑料膜封板,室溫(18-25.℃)孵育2小時

4

去掉封板膜,按以下程序洗板:

a.  吸出孔內(nèi)液體。

b.  每孔加入300ul1X的洗滌緩沖液

c.  吸出孔內(nèi)液體

d.  重復(fù)步驟bc兩次

5

加入50ul生物標記的IL-33抗體到各孔

6

用封板膜,封板,室溫(18-25.℃)孵育1小時

7

重復(fù)步驟4

8

加入100ul親和素-HRP溶液到各孔

9

用塑料膜封板,室溫(18-25.℃)孵育30min

10

重復(fù)步驟4

11

加入100ul即用型TMB底物溶液至各孔

12

室溫避光孵育5-15min,用鋁箔包住反應(yīng)板,   避免光照。

13

加入100ul   H2SO4到各孔,終止反應(yīng)。

在分光光度計中讀取結(jié)果。450nm作為初始波長,620nm作為參考波長。

結(jié)果分析

以吸光度為Y軸,相應(yīng)的IL-33標準品濃度為X軸做標準曲線。樣品的IL-33含量可根據(jù)其O.D.值由標準曲線推斷出來。

更多產(chǎn)品詳情,請聯(lián)系Diaclone中國區(qū)總代理北京博蕾德生物科技有限公司。



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